来源:bob官网下载 发布时间:2025-05-11 09:41:59
19岁事故罹难的健康男性的视网膜安排,由Amy Aotaki-Keen建系于1986年。该细胞系表达视网膜色素细胞特有的分子符号如胞内视黄醛结合蛋白和PRE-65。
气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培育箱湿度为70%-80%。
3、在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,彻底培育基重悬细胞;
4、将培育瓶放入37度培育箱消化(1到2分钟,难消化的细胞恰当添加时刻);
5、消化到细胞大部分变圆并掉落,轻敲培育瓶后参加3-4ml完培停止消化;
6、混匀细胞吸出,1000rpm离心3-5min,弃上清;补加1-2ml完培吹匀;
冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配(引荐运用DELF无血清非程序细胞冻存液Delf-16090进行冻存细胞,快速,快捷)。
按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标示好称号、代数、日期等信息。
1、消化并离心搜集细胞,计数,引荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml;
3、将冻存管转入程序冻存盒,放入-80度冰箱过夜,第二天转入液氮保存;没有程序冻存盒的实验室,参加细胞后能够将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min,再-20度静置2h后转入-80度过夜,第二天转入液氮保存;
1、一切动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请留意防护,一切废液及触摸过此细胞的器皿需求灭菌后方能丢掉。
2、主张在复苏冻存细胞时一直运用防护手套、衣服和戴上防护面罩。留意:冻存管浸没在液氮中会走漏,并会渐渐充溢液氮。冻结时,液氮转化成气相或许会引起容器爆破或用风险力吹掉其盖子,由此发生飞扬的碎屑形成人员损伤。